Comment compter le nombre de cellules

Expériences microbiennes exigent souvent que nous savons exactement combien de bactéries, par exemple, sont présents. Connaissant le nombre de cellules microbiennes aide pour indiquer si les cellules sont en croissance ou de mourir et il aide les expériences soient cohérentes au jour le jour.

Méthodes pour déchiffrer le nombre de cellules présentes facilement et avec précision sont utilisées dans les laboratoires de microbiologie tous les jours. Ceux-ci comprennent des méthodes directes où les colonies sont directement comptés et des méthodes indirectes où une estimation du nombre de cellules est faite.

Les méthodes directes de comptage des cellules

Déterminer le nombre de cellules bactériennes qui sont vivants dans un échantillon est effectuée à l'aide numérations viables. Chaque méthode pour calculer le nombre d'organismes viables de tire profit du fait que lorsque une suspension de bactéries est plaqué sur un milieu solide, chaque produit vivent cellule bactérienne se développera pour former une colonie, qui est suffisamment grand pour être vu.

Lorsque la concentration de bactéries dans un échantillon est élevée, il doit être dilué suffisamment pour que les colonies sont distincts les uns des autres, ce qui se fait avec dilution en série.

Sur la figure, une culture de bactéries est diluée de façon répétée par addition d'un volume fixe au premier tube (le premier de dilution) et en prenant ensuite un volume fixe du premier tube et en l'ajoutant à la deuxième tube (la deuxième dilution). Cette opération est répétée plusieurs fois (ce qui est pourquoi il est appelé en série dilution) dans le but de diluer la culture bactérienne d'origine.

Un petit volume de chaque dilution est ensuite étalée sur agar et cellules bactériennes individuelles sera chaque forme une colonie. Dilutions croissantes se traduira par une diminution du nombre de bactéries présentes et, par conséquent, une diminution du nombre de colonies sur chaque plaque de gélose. Le nombre de colonies est ensuite utilisé pour calculer l'arrière pour déterminer le nombre exact de cellules qui étaient présents dans l'échantillon original.

Pour calculer le nombre de cellules viables dans l'échantillon d'origine, le nombre de colonies présentes après les plaques ont été incubées est multipliée par le facteur de dilution. Le nombre de cellules dans un échantillon est habituellement exprimée en unités formant des colonies (UFC) par unité de volume (dans ce cas ml) ou CFU / mL.

Lorsque le nombre de cellules dans un échantillon est très faible, par exemple dans l'eau du lac, un grand volume de l'échantillon peut être passé à travers un filtre, qui est ensuite mis en culture avec le milieu approprié pour produire des colonies du microbe d'intérêt. Dans ce cas, le nombre de colonies est divisé par le volume d'échantillon filtré.

Par exemple, si 5 litres (L) d'eau du lac ont été filtrés et 100 colonies sont apparues après incubation, le nombre initial de bactéries dans l'eau était de 100 colonies / 5 L = 20 UFC / L.

Une autre manière de compter le nombre de cellules dans un échantillon est par Chiffres microscopiques directs. Avec cette méthode, toutes les cellules de l'échantillon - vivants ou morts - sont comptés, mais il vous donne une estimation immédiate du nombre de bactéries, sans la nécessité d'incuber un échantillon pendant 24 heures ou plus.

Les méthodes indirectes de cellules de comptage

Bien que pas aussi précis, les méthodes indirectes sont plus rapides et plus pratique que les méthodes directes à estimer le nombre de microbes dans un échantillon.

Turbidité est la quantité de dispersion de la lumière provoquée par les cellules dans une culture liquide. Une machine appelée spectrophotomètre passe un faisceau de lumière à travers un tube transparent contenant une culture bactérienne. Comme le nombre de cellules dans une culture augmente, plus la lumière est diffusée et moins de son passage à travers le tube à enregistrer sur l'autre côté.

La turbidité est exprimée en absorbance et en tant que densité optique (DO). Plus le nombre (entre 0 et 2), le plus concentré les cellules dans la solution.

Une autre façon d'évaluer indirectement le nombre de cellules est de mesurer l'activité métabolique de l'échantillon pour un substrat spécifique. De cette manière, la quantité de déchets produits - soit un gaz qui peut être capturé et mesuré ou un metabolite qui peut être utilisé avec un indicateur dans le support - peut être utilisé pour calculer le nombre de cellules en croissance sont dans la culture.

La dernière méthode pour évaluer indirectement le nombre de cellules est calculé par le poids sec de l'organisme en culture. Cette méthode est souvent utilisée par des champignons qui forment des colonies filamenteuses longues qui ne sont pas facilement brisées par dilution. L'échantillon est concentré et le liquide est éliminé. Ensuite, les cellules sont séchées et pondérées.